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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱(chēng)：小鼠脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞

英文名稱(chēng)：Mouse Choroidal Melanocyte Cells

組織來(lái)源：脈絡(luò)膜

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠脈絡(luò)膜黑色素分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對(duì)外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來(lái)的外力的沖擊作用通過(guò)玻璃體傳到后極部時(shí)，堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時(shí)對(duì)視覺(jué)系統(tǒng)起保護(hù)作用，對(duì)整個(gè)視覺(jué)神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營(yíng)養(yǎng)和遮光作用。

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞先用消化、后-膠原酶混合消化結(jié)合專(zhuān)用培養(yǎng)基篩選法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脈絡(luò)膜黑色素經(jīng)Dopa染色檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：長(zhǎng)梭形

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠脈絡(luò)膜黑色素體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠周期素依賴(lài)性激酶2(CDK2)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： CDK2 ELISA Kit

Mouse proliferating cell nuclear aigen aibody (PCNA) ELISA Kit 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)檢測(cè)試劑盒

MouseBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKit 小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanInvolucrin,iNVELISAKit人套膜蛋白

微型RNA(miRNA)表達(dá)載體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒10次

ELISAKitMIP-1β/CCL4大鼠巨噬細(xì)胞癥蛋白1β

TNFRSF17重組小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

PGA4重組人 PGA4 / Pepsinogen A 蛋白 Protein

CTRC Protein Human 重組人 CTRC / chymotrypsin C 蛋白

SIGIRR Protein Mouse 重組小鼠 SIGIRR / TIR8 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

CTRC Protein Human 重組人 CTRC / chymotrypsin C 蛋白

TNFRSF17重組小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

SIGIRR Protein Mouse 重組小鼠 SIGIRR / TIR8 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

PGA4重組人 PGA4 / Pepsinogen A 蛋白 Protein

小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat alkaline phosphatase (ALP) ELISA Kit 大鼠堿性0酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒

HumanFreeProteinS,FP-SELISAKit 人游離蛋白S(FP-S)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanacetylcholinereceptoraibody,AChRab檢測(cè)試劑盒人乙酰受體抗體(AChRab)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

正常人體腸組織S9組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-cenolandcenosomeaibody,ACAELISAKit小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠脈絡(luò)膜黑色素細(xì)胞小鼠抗抗體(AOAb)檢測(cè)試劑盒      試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精酸加壓素(ADH/VP/AVP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗鹽抵抗的酸性0酸酶(AP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用