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細胞簡介：

小鼠肝外膽管上皮分離自肝外膽管組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也制造消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。臨床上常見的膽管病變如膽道閉鎖、先天性膽總管囊腫、原發性硬化性膽管炎等，都是以膽管上皮細胞為病變的靶位，引起膽管上皮的損傷。了解正常膽管上皮細胞的生物學特征和病變膽管上皮細胞的病理生理學特征對研究膽管病變的發病機制、診斷和治療具有重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠肝外膽管上皮采用膠原酶灌注消化法后，再用膠原酶-DNA酶聯合消化，接種至預先包被鼠尾膠原的培養瓶中，通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠肝外膽管上皮經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

豬血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪酸激酶2(Tie-2)ELISAKit   ELISA. 

豬血管生成素1(ANG-1)ELISAKit   ELISA. 

豬乙酰受體抗體(AChRab)ELISAKit   ELISA. 

豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISAKit   ELISA.

豬纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA 試劑盒

Human maix metalloproteinase 13 (MMP-13) ELISA Kit 人基質金屬蛋白酶13(MMP-13)試劑盒

Rabbitmaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISAKit 兔基質金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforai-DNaseB(Humanai-deoxyribonucleaseB)ELISAKit人抗DNA酶B抗體

血液α-L-巖藻糖苷酶(AFU)比色法定量試劑盒20次

PorcineHeatShockProtein70,HSP-70ELISAKit豬熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒

PILRB重組小鼠 PILRB1 蛋白  Protein

半乳糖凝集素9C(GAL9C)重組蛋白 Recombinant Galectin 9C (GAL9C)

MID1IP1重組人 MID1IP1 蛋白 (His 標簽) Protein

BID Protein Human 重組人 BID 蛋白

DDR2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

半乳糖凝集素9C(GAL9C)重組蛋白 Recombinant Galectin 9C (GAL9C)

BID Protein Human 重組人 BID 蛋白

PILRB重組小鼠 PILRB1 蛋白  Protein

DDR2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

MID1IP1重組人 MID1IP1 蛋白 (His 標簽) Protein

小鼠肝外膽管上皮細胞大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)試劑盒 ，英文名： Casp-9 ELISA Kit

Rabbit major histocompatibility complex class I (MHC I and /RLA I) ELISA Kit 兔主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)試劑盒

東方體核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-4(Humanmaixmetalloproteinase4)ELISAKit人基質金屬蛋白酶4

體液基質金屬蛋白酶(MMP-13)活性比色法定量試劑盒20次(10樣本)

ELISAKitVA犬A

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。