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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人角膜基質(zhì)分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細胞層。角膜基質(zhì)層是角膜的主要組成部分，占據(jù)角膜厚度的90%，由角膜基質(zhì)細胞、膠原纖維和細胞外基質(zhì)構(gòu)成。角膜基質(zhì)層缺損的修復(fù)主要由角膜基質(zhì)細胞的增殖及分泌細胞外基質(zhì)完成。角膜基質(zhì)層具有結(jié)構(gòu)規(guī)整，透明度高的特點，正常情況下角膜基質(zhì)細胞分泌組成基質(zhì)層的成分，維持角膜的透明度，此細胞對于角膜損傷的修復(fù)具有重要意義。角膜基質(zhì)細胞，存在于角膜基質(zhì)層中，在正常情況下，處于靜止狀態(tài)。但當角膜損傷時，不同上皮來源的因子及環(huán)境信號，將影響角膜基質(zhì)細胞的應(yīng)答反應(yīng)，決定著角膜能否被修復(fù)。

方法簡介：

公司實驗室分離的人角膜基質(zhì)采用膠原酶消化后組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人角膜基質(zhì)經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠生長調(diào)節(jié)致癌基因α(GROα/CXCL1/MGSA)檢測試劑盒 ，英文名： GROα/CXCL1/MGSA ELISA Kit

Neuroophic factor mouse glial cell line derived (GDNF) ELISA Kit 小鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)檢測試劑盒

MouseRetinol-bindingprotein4,RBP-4ELISAKit 小鼠結(jié)合蛋白4(RBP-4)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanPeosidineELISAKit人戊糖素

同位素[γ32P]ATP激酶標記GST融合蛋白篩選試劑盒10次

ELISAKitx大鼠硫氧化還原蛋白

HA重組甲型流感 H13N8 (A/black-headed gull/Netherlands/1/00) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

RNF148(Ring finger protein 148 0.5mgRNF148(Ring finger protein 148) 環(huán)指蛋白148抗原

TNFRSF10D重組人 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 Protein

CGB5 Protein Human 重組人 CGB5 蛋白 (Fc 標簽)

IFNB1 Protein Human 重組人 Interferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白 (Fc 標簽)

RNF148(Ring finger protein 148 0.5mgRNF148(Ring finger protein 148) 環(huán)指蛋白148抗原

CGB5 Protein Human 重組人 CGB5 蛋白 (Fc 標簽)

HA重組甲型流感 H13N8 (A/black-headed gull/Netherlands/1/00) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

IFNB1 Protein Human 重組人 Interferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白 (Fc 標簽)

TNFRSF10D重組人 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 Protein

小鼠特異生長因子/相關(guān)因子(TSGF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai mitochondrial aibody (AMA) ELISA Kit 人抗線粒體抗體(AMA)檢測試劑盒

Humanproteindisulfideisomerase,PDIELISAKit 人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACA-IgA(Humanai-cardiolipinaibodyIgA)ELISAKit人抗心0脂抗體IgA

液相法去內(nèi)毒素試劑盒20次

Mouseosteonectin,ONELISAKit小鼠骨粘連蛋白(ON)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人角膜基質(zhì)細胞小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T