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細(xì)胞簡介：

人呼吸道上皮分離自呼吸道；呼吸道是肺呼吸時氣流所經(jīng)過的通道，有肺脊椎動物的呼吸道分上、下兩部：鼻、咽和喉合稱上呼吸道。氣管及其以后一分再分的管道，合稱為下呼吸道，或稱為氣管樹。氣管樹是隨著動物的進化逐漸復(fù)雜化的。整個呼吸道內(nèi)表面都分布有分泌液和纖毛（鼻孔、咽后壁和聲帶黏膜除外），它能溫暖（或冷卻）、濕潤和凈化吸入的空氣，對于呼吸器官和機體有著保護作用。呼吸道以骨或軟骨做支架，其內(nèi)表面覆蓋著黏膜，黏膜內(nèi)分布著豐富的毛細(xì)血管。呼吸道上皮細(xì)胞屬于假復(fù)層纖毛柱狀上皮，分布于呼吸道的內(nèi)表面，主要由柱狀，杯形，梭形和錐形等不同形狀細(xì)胞組成。看上去像復(fù)層上皮，但實際上所有細(xì)胞底部均附于基膜上，屬單層上皮，故稱假復(fù)層柱狀上皮，上皮表面有纖毛，杯狀細(xì)胞可分泌粘液，包裹著大量細(xì)菌，借助纖毛不斷擺動將其慢慢移動至出消化道。

方法簡介：

公司實驗室分離的人呼吸道上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人呼吸道上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠紅細(xì)胞生成素受體(mouse EPOR)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(mouse ECP)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽-78(mouse ENA-78)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠血管內(nèi)皮抑素(mouse Endostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ai alpha fodrin aibody IgG/IgA (-Fodrin IgG/IgA) ELISA Kit 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)試劑盒

Humanglycosylatedserumprotein,GSPELISAKit 人糖化蛋白(GSP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAlpha-fetoprotein,AFP試劑盒人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物半胱(cysteine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

Monkeyβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

LEPR重組人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

糖原合酶激酶3α(GSK3α)重組蛋白 Recombinant Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a)

CNPY3重組人 CNPY3 / PRAT4A / ERDA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

DLL4 Protein Human 重組人 DLL4 / Delta4 蛋白

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

糖原合酶激酶3α(GSK3α)重組蛋白 Recombinant Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a)

DLL4 Protein Human 重組人 DLL4 / Delta4 蛋白

LEPR重組人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CNPY3重組人 CNPY3 / PRAT4A / ERDA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

人呼吸道上皮細(xì)胞大鼠血管內(nèi)皮生長因子C(VEGFC)試劑盒 ，英文名： VEGFC ELISA Kit

Mouse noradrenaline (NA) ELISA Kit 小鼠去甲(NA)試劑盒

Mousemonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP-1/MCAFELISAkit 小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanbactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPIELISAKit人殺菌性/通透性增加蛋白

細(xì)胞EPHA1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPP大鼠蛋酸酶

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。