產品名稱：熒光素酶
產品特點：熒光素酶的相關產品：EAAT3(Excitatory amino acid transporters 3 0.5mgEAAT3(Excitatory amino acid transporters 3) 膠質細胞谷運載蛋白3抗原CANT1 Protein Human 重組人 CANT1 蛋白OLR1重組大鼠 OLR1 / LOX1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
產品型號：
更新日期：2024-11-19
訪問次數：760
熒光素酶的詳細資料：
產品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產品英文名稱：Luciferase firefly
產品中文名稱：熒光素酶
規格：10mg
貨號：EY-01X8581
用途：僅供科研研究實驗
特點&優勢:
序列:氨基酸序列來源于：Photinuspyralis（北美螢火蟲）正常表達的熒光素酶。
蛋白長度：重組螢火蟲熒光酶素，預測的理論分子:量為62 KDa。
純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測
產品形式:液體形式
保存建議：本產品為液體溶液，需要保存在-20℃。為了保持酶活性:，從而保存更長時間，建議分裝，避免反復凍融。
運輸條件:常溫運輸
背景
螢火蟲熒光素酶催化熒光素與ATP的反應并產生黃綠色光。該酶的分子量為62 kDa，在過氧化物酶體中表達。螢火蟲熒光素酶在細胞生物學和分子生物學中非常有用，能用于細胞活性:檢測和ATP定量檢測的試劑盒研發。
本產品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臜產物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數后可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成。
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操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物。
(二)構建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質粒的表達菌種
1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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