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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱EdU Cell Proliferation Image Kit (Orange Fluorescence)

產(chǎn)品中文名稱EdU法細(xì)胞增殖成像分析試劑盒（橙色熒光）

規(guī)格：100T/500T
貨號(hào)：EY-01X8522
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

•提供優(yōu)化的陰性對(duì)照品，排除假陽(yáng)性。

• 無(wú)須抗體。

• 無(wú)變性步驟，保持細(xì)胞形態(tài)和DNA完整性。

• 簡(jiǎn)單，可靠，省事的創(chuàng)新方法。

• 的AbFluor 545 azide (Ex/Em = 546/565 nm)具有良好的光穩(wěn)定性與抗淬滅性。

• 針對(duì)熒光顯微鏡進(jìn)行優(yōu)化。

保存建議請(qǐng)參閱說(shuō)明書中各個(gè)組件的存儲(chǔ)條件，自發(fā)貨之日起，按照推薦的保存條件，有效期為12個(gè)月。

運(yùn)輸條件藍(lán)冰運(yùn)輸

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

1. 本試劑盒是單溶液式細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑,主要成分包含MTS和一個(gè)電子耦合試劑,溶液的穩(wěn)定性強(qiáng),反應(yīng)的靈敏度高。

2. 操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

3. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

4. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

5. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。