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本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肺炎病毒（PVM）表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠肺炎病毒（PVM）表達(dá)。用純化的大鼠肺炎病
毒（PVM）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中肺炎病毒（PVM）相結(jié)合，經(jīng)洗
滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的肺炎病毒（PVM）抗體結(jié)合，形成抗體
抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化
成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），
與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中大鼠肺炎病毒（PVM）的存在與否。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液
2 酶標(biāo)試劑
3 酶標(biāo)包被板
4 樣品稀釋液
5 顯色劑 A 液
6 顯色劑 B 液
標(biāo)本要求
20ml×1 瓶
6ml×1 瓶
12 孔×8 條
6ml×1 瓶
6ml×1 瓶
6ml×1/瓶
7 終止液
8 陽(yáng)性對(duì)照
9 陰性對(duì)照
10 說(shuō)明書(shū)
11 封板膜
12 密封袋
6ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
1 份
2 張
1 個(gè)
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50!l。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40!l，然后再加待測(cè)樣品 10!l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50!l，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50!l，再加入顯色劑 B50!l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50!l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
操作程
計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陰性
陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陽(yáng)性
。
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
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